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                      双荧光素酶实验

                      实验原理

                              荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪(化学发光仪)测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

                              双荧光素酶体系,即有两种荧光素酶,比较常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素,而海肾荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。以其中一个作为内参对照,即表达量基本恒定,用于减少试验中不同处理间所固有的变化,包括培养细胞的数目及活力的差异,细胞转染及裂解的效率,而另外一个荧光素酶则作为报告基因,用于指示不同处理条件下基因的表达情况。


                      实验应用:

                      潜在启动子/启动子核心区域检测;

                      潜在增强子/?#31181;谱?#31561;调控子核心元件检测;

                      启动子区可能的转录因子结合位点检测;

                      启动子/增强子与转录因子的相互作用;

                      病毒/细胞相互作用;

                      药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(?#31181;?#25110;增强);

                      射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(?#31181;?#25110;增强);

                      microRNA靶基因验证。

                      以双荧光素酶实验进行microRNA靶基因验证为例,介绍相关的实验流程。


                      实验流程
                      服务提示

                      1.  请参考细胞收样注意事项

                      2.  请告知相关的基因信息(名称、序列、ID等)

                      3.  巴菲尔生物提供标准实验流程报告、相关的实验图片、实验数据等。

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